瑞孚迪（Revvity） 影像料理决策助力炎症探针开拓

巨噬细胞在宿主驻扎和免疫经由中发达着至关紧迫的作用。在不同的微环境中，静息巨噬细胞极化为M1（促炎）或M2（抗炎）巨噬细胞。M1巨噬细胞在感染或组织毁伤时间会被脂多糖 （LPS） 激活，它们产生多种促炎细胞因子以及免疫反应。通过分子生物学才智不错考虑巨噬细胞不同景况。然则，巨噬细胞在活体内动态变化的行为仍然知之甚少。因此，开拓活化的M1巨噬细胞高度特异性的探针，大略更好地了解巨噬细胞的功能和能源学以及炎症条目下诊疗插手的细胞反应。

M1巨噬细胞进行代谢再行编程，增强糖酵解，以促进细胞因子产生增多，反应炎症信号。寻找大略介导巨噬细胞中糖酵解和M1极化的新靶点成为新成像本领发展的关节。N-甲基-D-天冬氨酸受体（NMDAR）是离子型谷氨酸受体，主要作用是律例核心神经系统的突触可塑性。它们在学习、牵挂和神经元熟谙中起着紧迫作用。然则多样类型的东说念主类癌症和巨噬细胞中检测到NMDAR的笔据也越来越多，如NMDAR受体介导的钙信号通路产生计性氧（ROS），导致巨噬细胞中COX-2抒发增强。这也指示NMDAR如安在M1巨噬细胞极化中发达作用，以及它们是否不错应用于监测多样炎症性疾病的炎症反应是值得考虑的。

最初，考虑东说念主员发现NMDAR在LPS处理的巨噬细胞中过抒发，随后教化M1巨噬细胞极化。从机制上讲，NMDAR介导Ca2+的积贮，从而参与到LPS通过上调PI3K/AKT/mTORC1信号传导进行糖酵解。

基于NMDARs在M1巨噬细胞极化中的生物学联系性，考虑东说念主员以为NMDARs不错成为炎症性疾病中M1巨噬细胞散播动态可视化的紧迫靶标。通过引入NMDAR抗体和红外荧光染料FSD Fluor™ 647，制备了NMDAR靶向成像探针NMDAR-FSD Fluor 647简称为N-TIP。同期，为了进行特异性考虑也制备了同型对照兔IgG单克隆Isotype-FSD Fluor™™ 647简称为I-TIP。

借助Operetta CLS的40倍水镜进行Z轴扫描，并愚弄Harmony 4.9软件进行3D重建和数据分析，缔造体外分析决策。罗致基于这种3D的成像本领，大略可视化成像探针的细胞名义聚拢来笃定N-TIP在LPS刺激的BMDM（鼠骨髓开始巨噬细胞）细胞膜上的功能聚拢（下图）。使用这种基于3D的成像才智，咱们不错明晰地识别测试细胞的细胞膜（绿色）、细胞核（蓝色）、细胞质（白色）和特异性聚拢毁伤的I-TIP或N-TIP（红色）。当应用I-TIP时，在圆善的BMDM和LPS刺激的BMDM中无法检测到红色信号。然则，在圆善BMDM和LPS刺激的BMDM中王人不雅察到N-TIP聚拢毁伤（红色信号）。而且，LPS刺激的BMDM中的红色信号赫然高于圆善BMDM。随后，考虑东说念主员也用流式进行了考证。

基于N-TIP与M1极化巨噬细胞遴荐性聚拢的发现，接下来评估了使用N-TIP当作活体小鼠炎症反应的新式显像剂的可行性。关于炎症模子，罗致了LPS教化的炎症和CG教化的炎症，这在一些炎症考虑中被正常用。

LPS炎症教化后，通过静脉打针赐与小鼠N-TIP，并在指定时刻测量体内荧光。正如预期的那样，在打针N-TIP后5小时，LPS打针的爪子中露馅发炎的病变，但在PBS打针的爪子中莫得。LPS教化的发炎病变可不雅察到至24h。然则，当应用I-TIP时，对照爪和LPS打针爪之间的FL信号莫得各异。

相同，在CG教化的炎症的情况下，不错最初使用N-TIP在炎症后5小时检测发炎的病变，并执续到24小时。I-TIP无法鉴别对照和发炎病变。咱们进一步使用IVISense Cat B 680 FAST（一种用于检测炎症病变巨噬细胞的探针）和N-TIP进行了体内成像考虑。用N-TIP不雅察到的发炎病变与用IVISense Cat B 680 FAST不雅察到的病变终点，这标明NMDAR-flour 647可用于跟踪促炎性巨噬细胞。

之后，考虑东说念主员探求N-TIP介导的巨噬细胞成像才智是否具有评估抗炎剂在活体小鼠中的诊疗终端的后劲。录取在临床前和临床中已被正常用于诊疗炎症性疾病的DEX当作考虑对象。缔造CG教化的炎症，然后通过腹腔打针进行DEX诊疗，以评估DEX的诊疗终端。在炎症教化后长达24小时的发炎病灶中检测到强荧光信号。与对照小鼠比拟，DEX处理赫然缩短了发炎病变的荧光信号。进一步确认了N-TIP的生物散播。与体内考虑终端一致，体外成像露馅CG打针的爪子中存在浓烈的荧光信号且DEX处理的小鼠的赫然减少。

以上终端标明NMDAR介导的糖酵解在M1巨噬细胞联系炎症中起着关节作用。而且，基于NMDAR开拓的靶向成像探针可能有助于体内炎症反应的考虑。瑞孚迪的高内涵和活体成像的本领，提供给考虑东说念主员新的考虑器具，从而在体外和活体内春联系探针的终端进行全面评价。

巨噬细胞在宿主驻扎和免疫经由中发达着至关紧迫的作用。在不同的微环境中，静息巨噬细胞极化为M1（促炎）或M2（抗炎）巨噬细胞。M1巨噬细胞在感染或组织毁伤时间会被脂多糖 （LPS） 激活，它们产生多种促炎细胞因子以及免疫反应。通过分子生物学才智不错考虑巨噬细胞不同景况。然则，巨噬细胞在活体内动态变化的行为仍然知之甚少。因此，开拓活化的M1巨噬细胞高度特异性的探针，大略更好地了解巨噬细胞的功能和能源学以及炎症条目下诊疗插手的细胞反应。

M1巨噬细胞进行代谢再行编程，增强糖酵解，以促进细胞因子产生增多，反应炎症信号。寻找大略介导巨噬细胞中糖酵解和M1极化的新靶点成为新成像本领发展的关节。N-甲基-D-天冬氨酸受体（NMDAR）是离子型谷氨酸受体，主要作用是律例核心神经系统的突触可塑性。它们在学习、牵挂和神经元熟谙中起着紧迫作用。然则多样类型的东说念主类癌症和巨噬细胞中检测到NMDAR的笔据也越来越多，如NMDAR受体介导的钙信号通路产生计性氧（ROS），导致巨噬细胞中COX-2抒发增强。这也指示NMDAR如安在M1巨噬细胞极化中发达作用，以及它们是否不错应用于监测多样炎症性疾病的炎症反应是值得考虑的。

最初，考虑东说念主员发现NMDAR在LPS处理的巨噬细胞中过抒发，随后教化M1巨噬细胞极化。从机制上讲，NMDAR介导Ca2+的积贮，从而参与到LPS通过上调PI3K/AKT/mTORC1信号传导进行糖酵解。

基于NMDARs在M1巨噬细胞极化中的生物学联系性，考虑东说念主员以为NMDARs不错成为炎症性疾病中M1巨噬细胞散播动态可视化的紧迫靶标。通过引入NMDAR抗体和红外荧光染料FSD Fluor™ 647，制备了NMDAR靶向成像探针NMDAR-FSD Fluor 647简称为N-TIP。同期，为了进行特异性考虑也制备了同型对照兔IgG单克隆Isotype-FSD Fluor™™ 647简称为I-TIP。

借助Operetta CLS的40倍水镜进行Z轴扫描，并愚弄Harmony 4.9软件进行3D重建和数据分析，缔造体外分析决策。罗致基于这种3D的成像本领，大略可视化成像探针的细胞名义聚拢来笃定N-TIP在LPS刺激的BMDM（鼠骨髓开始巨噬细胞）细胞膜上的功能聚拢（下图）。使用这种基于3D的成像才智，咱们不错明晰地识别测试细胞的细胞膜（绿色）、细胞核（蓝色）、细胞质（白色）和特异性聚拢毁伤的I-TIP或N-TIP（红色）。当应用I-TIP时，在圆善的BMDM和LPS刺激的BMDM中无法检测到红色信号。然则，在圆善BMDM和LPS刺激的BMDM中王人不雅察到N-TIP聚拢毁伤（红色信号）。而且，LPS刺激的BMDM中的红色信号赫然高于圆善BMDM。随后，考虑东说念主员也用流式进行了考证。

基于N-TIP与M1极化巨噬细胞遴荐性聚拢的发现，接下来评估了使用N-TIP当作活体小鼠炎症反应的新式显像剂的可行性。关于炎症模子，罗致了LPS教化的炎症和CG教化的炎症，这在一些炎症考虑中被正常用。

LPS炎症教化后，通过静脉打针赐与小鼠N-TIP，并在指定时刻测量体内荧光。正如预期的那样，在打针N-TIP后5小时，LPS打针的爪子中露馅发炎的病变，但在PBS打针的爪子中莫得。LPS教化的发炎病变可不雅察到至24h。然则，当应用I-TIP时，对照爪和LPS打针爪之间的FL信号莫得各异。

相同，在CG教化的炎症的情况下，不错最初使用N-TIP在炎症后5小时检测发炎的病变，并执续到24小时。I-TIP无法鉴别对照和发炎病变。咱们进一步使用IVISense Cat B 680 FAST（一种用于检测炎症病变巨噬细胞的探针）和N-TIP进行了体内成像考虑。用N-TIP不雅察到的发炎病变与用IVISense Cat B 680 FAST不雅察到的病变终点，这标明NMDAR-flour 647可用于跟踪促炎性巨噬细胞。

之后，考虑东说念主员探求N-TIP介导的巨噬细胞成像才智是否具有评估抗炎剂在活体小鼠中的诊疗终端的后劲。录取在临床前和临床中已被正常用于诊疗炎症性疾病的DEX当作考虑对象。缔造CG教化的炎症，然后通过腹腔打针进行DEX诊疗，以评估DEX的诊疗终端。在炎症教化后长达24小时的发炎病灶中检测到强荧光信号。与对照小鼠比拟，DEX处理赫然缩短了发炎病变的荧光信号。进一步确认了N-TIP的生物散播。与体内考虑终端一致，体外成像露馅CG打针的爪子中存在浓烈的荧光信号且DEX处理的小鼠的赫然减少。

以上终端标明NMDAR介导的糖酵解在M1巨噬细胞联系炎症中起着关节作用。而且，基于NMDAR开拓的靶向成像探针可能有助于体内炎症反应的考虑。瑞孚迪的高内涵和活体成像的本领，提供给考虑东说念主员新的考虑器具，从而在体外和活体内春联系探针的终端进行全面评价。